Водяная баня для определения группы крови

Определение группы крови по системе резус

Для определения резус-принадлежности крови используются стандартные антирезусные сыворотки, выпускаемые в ампулах. Комплект сывороток состоит из двух серий. Сыворотки должны храниться в холодильнике при температуре 4—8°. Срок годности их в этих условиях — 4 мес.

Перед использованием антирезусных сывороток необходимо проверить их годность: внешний вид, целость ампулы, групповую принадлежность, специфичность, титр содержащихся в сыворотке антирезусных антител и срок годности.

Используемые сыворотки имеют титр антител не менее чем 1:32.

Для определения резус-принадлежности исследуемой крови необходима водяная баня с терморегулятором и чистая сухая чашка Петри. Если нет специальной водяной бани, то можно использовать кастрюлю или стерилизатор емкостью не менее 2 л, куда наливается 1—1,5 л воды температуры 46—48°. Для контроля за постоянством температуры воды в бане необходим обычный водяной термометр. Чашка Петри должна быть абсолютно чистой и сухой, в противном случае капли сывороток будут по ней растекаться. Поэтому заблаговременно чашки Петри прокаливаются в сушильном шкафу при температуре 80—100°.

47. Определение резус-принадлежности крови на чашке Петри.

Резус-фактор определяется двумя сериями антирезусных сывороток, подобранных согласно групповой принадлежности исследуемой крови. Кровь берется из вены в чистую сухую пробирку в количестве 1—3 мл. Чашка Петри маркируется карандашом-стеклографом так, как показано на рис. 47, после чего глазной пипеткой на левую половину чашки наносятся по две капли антирезусной сыворотки одной серии, а на правую половину — по две капли сыворотки второй серии. Затем в обе сыворотки верхнего ряда добавляется по одной капле 10% взвеси исследуемых эритроцитов, набранных со дна пробирки пастеровской пипеткой. К сыворотке среднего ряда добавляется по одной капле 5—10% сывороточной взвеси стандартных резус-положительных эритроцитов, а к сыворотке нижнего ряда — по одной капле стандартной взвеси резус-отрицательных эритроцитов. Путем добавления стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов проверяется активность и специфичность сывороток. Если сыворотки обеих серий активны, то с резус-положительными эритроцитами они дадут агглютинацию. Отсутствие агглютинации с резус-отрицательными эритроцитами подтверждает специфичность стандартных сывороток. После перемешивания капель путем легкого покачивания чашки Петри ее помещают в водяную баню при температуре 46° на 10 мин. Через 10 мин чашку вынимают из бани, осторожным покачиванием чашки перемешивают эритроциты с сывороткой и при хорошем освещении на белом фоне читают результат реакции.

Как уже упоминалось, должна наблюдаться агглютинация стандартных резус-положительных эритроцитов (второй ряд) и не должно быть агглютинации стандартных резус-отрицательных эритроцитов (третий ряд). Если исследуемые эритроциты (первый ряд) дали агглютинацию, значит кровь больной резус-положительна. Отсутствие агглютинации эритроцитов в антирезусной стандартной сыворотке говорит о том, что кровь больной резус-отрицательна.

Если при определении группы крови больной или ее резус-принадлежности получился разноречивый результат (например, имеется агглютинация с одной серией сыворотки и нет с другой и т. п.), необходимо заново повторить всю реакцию.

Несмотря на то, что на этикетке консервированной крови указана ее групповая и резус-принадлежность, перед тем, как приступить к переливанию крови, необходимо вновь определить группу и резус-фактор донорской крови. Переливать надо всегда одногруппную кровь. Только в исключительных случаях, когда в связи с большой кровопотерей больной необходимо по жизненным показаниям произвести гемотрансфузию, а одноименной группы крови в родильном доме нет, допускается переливание крови группы 0 (I) Rh—. В связи с тем, что кровь группы 0 (I) Rh — не содержит агглютиногенов А и В и лишена резус-фактора, люди, имеющие такую кровь, называются универсальными донорами. Считается, что их кровь можно переливать почти всем людям.

Источник

Проведение пробы на индивидуальную совместимость по системе АВО и резус – фактору.

Проба на индивидуальную совместимость по системе АВ0:

· на чашку Петри наносят крупную каплю (0,1мл) сыворотки крови реципиента и малую каплю (0,01мл) крови донора из флакона;

· смешивают их между собой, покачивая чашку Петри;

Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по системе АВ0.

Проба на индивидуальную совместимость по резус-фактору — проводится по трем вариантам:

Проба с использованием водной бани:

Техника проведения пробы аналогична пробе на индивидуальную совместимость (описана выше), только после смешивания крови с плазмой чашка Петри помещается на водяную баню при температуре 42-45 0 С. Оценка результатов производится через 5-10 мин. Если происходит агглютинация, то кровь несовместима в отношении резус-фактора.

· на дно пробирки вносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина;

· содержимое перемешивают, вращая пробирку вокруг оси в течение 5 мин;

· добавляют 3-4 мл физиологического раствора и перемешивают не взбалтывая.

Наличие агглютинации эритроцитов свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента по резус-фактору.

Проба с использованием 10% желатина:

· на дно пробирки помещают 1 каплю эритроцитов донора, отмытых десятикратным объемом физ. раствора;

· добавляют 2 капли сыворотки реципиента и 2 капли, подогретого до разжижения, 10% раствора желатина;

· перемешивают и греют на водяной бане при 46-48 о С 10 мин;

· добавляют 6-8 мл физ. раствора, перемешивают не взбалтывая.

Наличие агглютинации свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента.

Проведение биологической пробы.

Струйно переливают 15-20 мл. крови, после чего в течение 3 мин наблюдают за состоянием больного.

При отсутствии клинических проявлений аллергических реакций или осложнений (учащение пульса, дыхания, появление одышки, затрудненное дыхание, гиперемия лица и т.д.) вводят вновь 15-20 мл. крови и в течение 3 мин. снова наблюдают. Еще раз повторяют эту операцию. Отсутствие реакций после трехкратной проверки служит основанием для осуществления всей гемотрансфузии.

Заполнение системы для внутривенного переливания кровезаменителей и крови.

Для переливания крови следует пользоваться пластиковой системой разового пользования с капроновым фильтром, который позволяет предупредить попадание тромбов в кровяное русло.

При переливании крови из пластикового мешка:

· кровь в мешке перемешивают;

· на центральную отводную трубку мешка накладывают кровоостанавливающий зажим;

· трубку обрабатывают спиртом и обрезают на 1 – 1,5 см ниже зажима;

· с канюли системы для переливания снимают предохранительный колпачок и систему присоединяют к мешку путем соединения конца трубки мешка с канюлей системы;

· мешок подвешивают вверх дном к штативу, систему с капельницей приподнимают и переворачивают таким образом, чтобы фильтр в капельнице располагается сверху;

· зажим снимают с трубки, капельницу наполовину заполняют кровью и накладывают зажим;

· снимают зажим и заполняют кровью часть системы, расположенной ниже фильтра, до полного вытеснения из нее воздуха и появления из иглы капель крови;

· несколько капель крови выпускают на тарелку для контрольного определения группы крови донора и проверки на совместимость;

· система готова для переливания.

При переливании из стандартного флакона:

· алюминиевый колпачок с крышки снимают;

· резиновую пробку обрабатывают спиртом или раствором иодопирона и прокалывают двумя иглами;

· к одной из этих игл присоединяют короткую трубку для поступления воздуха, конец которой устанавливают выше дна перевернутого флакона;

· к другой – систему для разового пользования. Флакон располагают в штативе вверх дном;

· систему заполняют кровью аналогичным образом, так же как и при использовании пластикового мешка.

Монтирование системы для кровезаменителей осуществляется так же, как для крови.

Рис. 30. Аппараты для переливания крови.

V. Методика исследования хирургического больного.

Исследование хирургического больного состоит из трех основных разделов: анамнестических, объективных данных и дополнительных методов исследования.

Источник

Определение группы крови по системе AB0

Для определения группы крови простым методом необходимы 8 глазных пипеток (отдельная для каждой группы серии сыворотки), мелкая тарелка, флаконы с изотоническим раствором хлорида натрия и гемагглю-тинирующие сыворотки 4 групп двух серий.

Определение крови с помощью стандартных сывороток называется «простой реакцией». Определение производится на тарелке, на которой восковым карандашом наносят обозначения групп сывороток. Сначала на тарелку наносят по 1—2 капли стандартных сывороток соответственно сделанным надписям в 2 ряда для двух различных серий. В каждую каплю сыворотки добавляют испытуемую кровь, взятую из пальца или из вены, и перемешивают покачиванием. Количество крови должно быть в 10—15 раз меньше, чем сыворотки. За реакцией наблюдают не более 5 минут, после чего делают заключение о группе крови по наличию агглютинации.

Различают 4 классические реакции, характерные для 4 групп крови.

Агглютинация (+) при смешивании крови со стандартными сыворотками

Группа крови	Группа стандартной сыворотки
0(1)	А (II)	В(Ш)	AB(IV)
0(1)	—	—	—	+
А (II)	+	—	+	+
В(Ш)	+	+	—	+
АВ (IV)	+	+	+	—

Агглютинация, образование «песка» в капле со смесью свидетельствуют о наличии группового антигена.

Двойная перекрестная реакция в сыворотке крови больного

· Простой метод определения группового антигена (группы крови) уточняется в изосерологической лаборатории с помощью двойной перекрестной реакции — определением групповых антител а и b в исследуемой сыворотке. Они выявляются с помощью стандартных эритроцитов А и В, заготовленных от доноров, имеющих соответственно А (II) и В (III) группы крови.

· В 2 отдельные капли сыворотки, нанесенные на тарелки, добавляют стандартные эритроциты групп А и В. Через 5 минут определяют результат по наличию агглютинации, которая выявляет агглютинин а в крови В (III) группы, агглютинин b в крови А (II) группы, агглютинины а и b в крови О (I) группы и отсутствие агглютинации в крови АВ (IV) группы.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА

Понятие «резус-фактор»

· У 85 % людей в крови имеется еще один агглютиноген — резус фактор (Rh), а у 15 % он отсутствует. На основании этого кровь всех людей делят на резус-положительную (Rh+) и резус отрицательную (Rh-). Резус-характеристика является наследственной и постоянна в течение всей жизни. При любом переливании крови необходимо точно определить резус-принадлежность реципиента и донора.

Определение резус-фактора методом конглютинации

· Существует несколько методов определения Rh-фактора. Наиболее распространен метод конглютинации на чашках Петри. Для этого исследования, кроме глазных пипеток и флакона с изотоническим раствором хлорида натрия, необходимо иметь чашки Петри, водяную баню с постоянной температурой 46—48 С и стандартные ан-тирезусные сыворотки всех групп системы АВО. Для анализа берут антирезусную сыворотку двух серий, од-ногруппную по системе АВО с исследуемыми эритроцитами. В чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева — одной серии, справа — другой в 3 ряда для 3 исследований. В каждую серию прибавляют по капле эритроцитов (исследуемые, контрольные Rh-положительные и контрольные Rh-отрицательные). После перемешивания чашку Петри помещают в водяную баню на 10 минут, после чего рассматривают в проходящем свете.

· Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее — об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.

Определение резус-фактора экспресс-методом

· В последнее время для определения резус-принадлежности применяют экспресс-метод. Реакцию проводят в пробирках без подогрева. Для этого необходима специальная, универсальная для всех групп крови системы АВО сыворотка, приготовленная особым способом на полиглюкине.

· В пробирку помещают 1 каплю сыворотки, добавляют 1 каплю исследуемых эритроцитов и после 3-минутного покачивания заливают 3—5 мл изотонического раствора хлорида натрия, трижды переворачивают пробирку и определяют результат в отраженном свете. Наличие агглютинации свидетельствует о наличии Rh-антигена.

Определение резус-фактора желатиновым экспресс-методом

· Широко применяется также желатиновый экспресс-метод, основанный на добавлении к крови 1 капли 10 % раствора желатина и 10-минутной инкубации пробирок при +37 °С и добавлении теплого изотонического раствора хлорида натрия; производят перемешивание содержимого пробирки. Желатин способствует исчезновению неспецифической агглютинации.

· На этом же принципе основан метод определения Rh с папаином.

· Любой из этих методов может быть использован в экстренных случаях. Независимо от результатов проведенных исследований и имеющихся данных об идентичности групп крови донора и реципиента перед переливанием крови необходимо провести пробы на индивидуальную совместимость.

Временная остановка кровотечения, правила наложения жгута.

Общие принципы терапии острой кровопотери складываются из следующих компонентов:
• немедленная временная остановка наружного кровотечения,
• ликвидация дефицита ОЦК,
• контроль эффективности терапии.

При кровотечениях из ран верхних конечностей пальцами следует прижать:
— подключичную артерию к I ребру в надключичной области кнаружи от места прикрепления грудинно-ключично-сосцевидной мышцы;
— подмышечную артерию к головке плечевой кости в подмышечной ямке;
— плечевую артерию к плечевой кости в верхней трети внутренней поверхности плеча у края двуглавой мышцы;
— лучевую артерию к лучевой кости в точке определения пульса;
— локтевую артерию к локтевой кости в верхней трети внутренней поверхности предплечья.

Пережатие поврежденных магистральных сосудов нижних конечностей осуществляют в следующих точках:
— бедренную артерию — ниже середины пупартовой связки к горизонтальной ветви лонной кости;
— подколенную артерию — по центру подколенной ямки к суставному концу бедренной кости;
— артерию тыла стопы — на середине расстояния между наружной и внутренней лодыжками ниже голеностопного сустава;
— заднюю берцовую артерию — к задней поверхности внутренней лодыжки.

Последующая временная остановка кровотечения, до хирургической обработки раны, достигается наложением давящей повязки или фиксацией конечности в максимально согнутом состоянии. Если эти способы остановки кровотечения оказываются неэффективными, используют наложение жгута.

Следует соблюдать правила наложения жгута:
1. Проксимальнее раны и максимально ближе к ней накладывают мягкую прокладку из одежды или любого другого материала, стараясь избежать складок.
2. Перед наложением жгута, для обеспечения оттока крови из поврежденной конечности, ее приподнимают на 20—30 сек.
3. Жгут следует накладывать так, чтобы его начальный участок перекрывался последующими турами.
4. При правильно наложенном жгуте кровотечение из раны прекращается, исчезает пульс и бледнеют кожные покровы ниже его наложения.
5. К одежде пострадавшего или жгуту надежно фиксируют записку с указанием даты и времени его наложения.
6. Конечность иммобилизуют с помощью транспортной шины или подручных средств. Жгут нельзя закрывать бинтовой повязкой, он должен быть хорошо виден!
7. На этапе эвакуации через каждые 1,5—2 часа (зимой через 20—30 мин.) жгут расслабляется для восстановления кровотока в конечности, а поврежденный сосуд на это время прижимается пальцем выше места ранения.
8. Венозное и капиллярное кровотечение останавливают путем наложения тугой давящей повязки. Обычно этого бывает достаточно. При ножевом ранении крупной магистральной вены можно провести тугую тампонаду раны или наложить кровоостанавливающий жгут.

Критериями правильно наложенного жгута являются:

 Остановка кровотечения.
Прекращение периферической пульсации.
Бледная и холодная конечность.

Подготовка операционного поля.

Накануне операции больной принимает ванну, ему сбривают волосы в области операционного поля. Операционное поле отгораживают стерильным бельем, которое фиксируют специальными зажимами. Перед наложением швов на рану, при расширении кожного разреза и после наложения швов края раны вновь обрабатывают йодонатом. При такой обработке обеспечивается хорошая дезинфекция. Применять настойку йода для обработки кожи операционного поля запрещается.

Для обработки кожи операционного поля применяют йодопирон, йодонат. Рабочие растворы йодоната готовят непосредственно перед применением путем разбавления исходного раствора в 5 раз кипяченой водой.

Кожу операционного поля без предварительного мытья обрабатывают двукратным смазыванием стерильными тампонами, смоченными 5-7 мл раствора йодоната.

Обработку операционного поля можно проводить 0,5% раствором нашатырного спирта, который при помощи стерильного тампона наносится на кожу, затем трижды смазывают кожу спиртом. Кожу операционного поля можно обрабатывать 1 % раствором бриллиантового зеленого или 5% раствором танина в спирте, гибитаном.

Эффективным методом защиты раны является подклеивание в области операции специальной стерильной пленки, через которую производят разрез. После окончания операции, перед наложением швов, пленку удаляют. Если на коже в области операционного поля имеются инфицированные ссадины, ранки, фурункулы, любой метод обработки не предохранит от инфицирования рану. В подобных случаях операцию (если это возможно по характеру заболевания) лучше отменить до санации кожных покровов. При экстренной операции инфицированные участки должны быть изолированы специальными наклейками.

Источник